1. PCR仪,梯度pcr仪与普通pcr仪有什么区别?
原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。
反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。
结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。
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2. 伯乐pcr仪怎么设置降落程序?
一般退火温度为从Tm+5度降落至Tm-10度,每度2个cycle,最后在tm-10度上增加5-10个cycle.例:Tm为58度,则从63度降落到48度,每度2个cycles,最后在48度加5-10个cycles。如果效果不好,可以再微调。
3. pcr灯寿命?
1、可同时检测5色荧光,用于多重PCR检测。
*2、ABI 7500 Fast快速实时荧光定量PCR激发光源:卤钨灯,使用寿命不低于2000小时,软件对光源寿命进行实时监测,确保光强和实验准确性。
*3、ABI 7500 Fast快速实时荧光定量PCR检测器:冷CCD成像系统,对96孔板同时成像,无时间差,保证结果的准确。
4、温度控制系统:Peltier半导体控温。
*5、ABI 7500 Fast快速实时荧光定量PCR升温速度不小于5.5℃/s,样本的升降温速度不小于3.5℃/S,具备支持35分钟以内完成40循环的荧光定量PCR实验的快速模式。
4. pcr仪温度梯度怎么分布?
pcr一般主要是指退火温度梯度。如果PCR仪支持的话,一次可以做好几个温度梯度,象AIB的可以做六个,而有些公司的是模仿梯度,比如一边高一边低,这样梯度温度可能误差大一点。如果仪器不支持,可能就麻烦了,想做六个温度就得做六次PCR了。每一次设成不同的温度。
如何设置梯度pcr建议最少5个(稀释10倍),最多不超过8个梯度(稀释5倍)每个梯度至少三个平行样。
5. pcr扩增仪操作过程及步骤?
1、 首先准备好反应管;
2、 打开机盖,将反应管平稳、端正的置入,盖好机盖; 3、 打开电源开关,按照机器屏幕显示的提示设定程序,用proceed键启动扩增,结束时出现“complete”,待风机停止工作,关闭电源。
注意事项:
(1) 使用PCR仪时要严格注意本机的使用环境条件和对电源的要求;
(2) 打开PCR仪机盖要轻,防止损坏机锁; (3) PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖;
(4) 要定期使用肥皂水清洗仪器的样品槽,不能使用强碱,高浓度酒精和有机溶剂擦洗;
(5) 产品出现故障时要请专业的维修人员或厂家维修人员维修
6. pcr可以无限次循环吗?
PCR(聚合酶链式反应)可以进行多次循环,但并非无限次循环。PCR是一种用于扩增DNA片段的技术,通过反复进行一系列温度变化来实现。循环的次数取决于所需扩增的DNA片段的数量和PCR反应的特定要求。一般来说,PCR反应会进行20到40个循环。超过这个循环次数可能会引起问题,如产生非特异性产物或引入错误。因此,在进行PCR实验时,循环次数需要根据实验的需要进行优化和控制。
7. 使用pcr仪容易犯的错误?
容易犯的错误有,1、PCR在产物序列中引入了错误,这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多,这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶,同时降低循环数。
2、PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象。
3、PCR产物何时需要用凝胶纯化,何时不需要?当凝胶分析扩增产物只有一条带时,则不需要使用凝胶纯化。当可见其他杂带时,则可能是积累了大量引物的二聚体,在克隆前需要做凝胶纯化。
4、如果实验中没有回收到目的片段,则需要继续进行对照实验。
5、实验中出现假阳性扩增,这是扩增系统受到污染的表现,应通过检查排除污染源。
6、实验中出现假阴性扩增,首先要考虑是否为仪器故障,仪器应正常运转,尤其要注意加热温度及各管间的差异是否符合实验要求,是否出现误差等。其次要考虑是否为试剂失效或无效引起,使用有效的试剂。